Het maximum aantal deelnemers is ook in 2021 vastgesteld op 150 renners, zijnde 25 ploegen van maximum 6 en minimaal 4 renners. Het vaste deelnemersveld voor de “U23 Road Series” wordt als volgt samengesteld: Voor zowel Nederland als België mogen 11 ploegen deelnemen. U23-renners die niet in het bezit zijn van een vergunning naam van een club die aan de U23 Road Series deelneemt, mogen niet voor zulke club uitkomen. U23 renners behorende tot UCI WorldTour teams en UCI ProContinentale teams zijn niet toegelaten. Elke organisator mag tevens 3 wildcards toekennen aan clubploegen(max. 3 buitenlandse) en regionale/provinciale/nationale selecties.
Hieronder treft u de ploegen met link naar hun website aan:
| Naam ploeg | Rugnr. | Website(s) | ||
| 1 |  | Lotto-Soudal Development Team | 1-6 |  |
| 2 |  | Abloc – Noord-Holland | 7-12 | |
| 3 | | Binggoal Casino – Wallonie Bruxelles DT | 13-18 | |
| 4 | | Metec – Solarwatt | 19-24 | |
| 5 | | EFC-L&R – Vulsteke | 25-30 | |
| 6 | | Amsterdam Racing Academy WPGA | 31-36 | |
| 7 | | Home Solutions – Soenens C.T. | 37-42 | |
| 8 | | Volkerwessels CT – HSK Trias | 43-48 | |
| 9 | | Basso Team Flandren | 49-54 | |
| 10 | | WV De Jonge Renner | 55-60 | |
| 11 | | Acrog – Tormans | 61-66 | |
| 12 | | UWCT Volharding – West Frisia | 67-72 | |
| 13 | | Mysenlan – Baboco Cyclinvest CT | 73-78 | |
| 14 | | John Deere NWVG – Allino Krush IJsselstreek | 79-84 | |
| 15 | | VDM-Trawobo Cycling Team | 85-90 | |
| 16 | | Sensa Kanjers voor Kanjers – Dutch Food Valley CT | 91-96 | |
| 17 | | Indulek-Doltcini – Derito CT | 97-102 | |
| 18 | | Zuid-Holland – Jan van Arckel – Swabo-Westland | 103-108 | |
| 19 | | Davo United Cycling Team | 109-114 | |
| 20 | | Limburg – Brabant Zuid-Oost | 115-120 | |
| 21 | | Selectie Cycling Vlaanderen | 121-126 | |
| 22 | | District Zuid West | 127-132 | |
| 23 | | TWC Maaslandster Zuid-Limburg | 133-138 | |
| 24 | | WCL Bergklimmers | 139-144 | |
| 25 | | SEG Racing Academie | 145-150 | |
